由沉降速度方程可知,顆粒的沉降速度與其大小成正比,若為球形顆粒,則與其直徑的平方成正比;與顆粒和介質(zhì)的密度差成正比。因此,顆粒越大,和介質(zhì)的密度差越大,沉降速度越大。顆粒大小和密度差是壓細(xì)胞分離的基礎(chǔ)。
大多數(shù)亞細(xì)胞的大小和密度都存在明顯差異。細(xì)胞核zui大,直徑達(dá)4~12μm,密度zui大。膜囊泡zui小,僅0.05~0.4μm,衍生囊泡的大小和密度受勻漿方法和勻漿介質(zhì)密度影響。線粒體直徑0.4~2.5μm,密度為1.19克/立方厘米,用
臺式大容量離心機(jī)差速離心法容易進(jìn)行分離。在這些亞細(xì)胞分離中顆粒大小起主導(dǎo)作用,但線粒體、溶酶體的大小和密度都有重疊,用常規(guī)方法難以分離。
臺式大容量離心機(jī)因轉(zhuǎn)子的材料組織疏密不均勻造成轉(zhuǎn)子質(zhì)心與幾何形心不一致,轉(zhuǎn)子運(yùn)轉(zhuǎn)時因質(zhì)量不對稱造成慣性主軸偏離旋轉(zhuǎn)軸,都會產(chǎn)生不平衡,產(chǎn)生附加力和力矩。高速運(yùn)轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)子相對離心力很大,很小的不平衡質(zhì)量會產(chǎn)生很大的離心慣性力,這樣會使離心機(jī)產(chǎn)生振動,增加動負(fù)荷,降低離心機(jī)的使用效果,縮短使用壽命,嚴(yán)重時會導(dǎo)致離心機(jī)損壞。
(1)高速離心時,對于沉淀量大的樣品要先低速除去大顆粒。
(2)不要用密度不同的樣品組成一對對應(yīng)管。
(3)一對對應(yīng)管中的樣品重量要相同、體積要相同。
(4)離心管帽要先平衡,不同材質(zhì)、不同機(jī)型的管帽重量不同,不要混用。